應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠Elisa試劑盒水平。用純化的大鼠膠原酶IELISA試劑盒抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入膠原酶IELISA試劑盒，再與HRP標記的膠原酶IELISA試劑盒抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膠原酶IELISA試劑盒呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠膠原酶IELISA試劑盒濃度。
大鼠Elisa試劑盒標本要求：
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠Elisa試劑盒注意事項：
1.大鼠Elisa試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.大鼠Elisa試劑盒底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.大鼠Elisa試劑盒不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。